引用本文 ↓

王小英,冯剑,黄梦利,等.海南黎药海巴戟多糖含量测定及其测量不确定度评估[J].生物资源, 2018, 40(4): 345-352.

Wang X Y, Feng J, Huang M L, et al. Polysaccharide content determination and measurement uncertainty evaluation of Morindae Citrifoliae Fructus [J]. Biotic Resources, 2018, 40(4): 345-352.

    摘要

    研究和探讨海南黎药海巴戟多糖含量,并对多糖含量测量过程中引入的不确定因素进行评估。采用苯酚-硫酸法测定海巴戟药材中多糖含量,并根据苯酚-硫酸法建立数学模型,找出影响不确定的因素,最终确定测量结果的合成不确定度和扩展不确定度。以D-葡萄糖作为对照品,浓度在0.002 5~0.012 5 g/L范围内线性关系良好(R2=0.999 4),重现性试验RSD=1.84%,4 h内显色稳定,加样回收率为98.05%(n=9,RSD=2.32%);16批海巴戟药材多糖含量为5.53%~12.63%,其多糖含量测定方法的合成不确定度为0.029 4~0.093 8,扩展不确定度为0.059 0~0.187 6。影响测量不确定度的主要因素有称量、浓度配制和吸光度。本研究建立的海南黎药海巴戟多糖含量测定方法适应性广、灵敏度高,若将测量结果不确定度纳入标准制定有助于对海巴戟药材含量分析方法的建立和质量标准的制定,有利于对海巴戟药材资源的开发。

    Abstract

    The content of polysaccharide was determined with phenol-sulfuric acid method, and the uncertainty factors introduced in the measurement process were also evaluated. The polysaccharide content of Morindae Citritolia Fructus was determined by phenol-sulfuric acid method, the mathematical model has been established according to the phenol sulfuric acid method to find out the factors that affect uncertainty, and the combined uncertainty and extended uncertainty of the measurement result were determined. The result showed that the polysaccharide content of Morindae Citritolia Fructus was a good linear relationship in 0.002 5~0.012 5 g/L (R2=0.999 4), reproducibility test of RSD=1.84%, the color stability in 4 hours, and the recovery rate 98.05% (n=9, RSD=2.32%). The combined uncertainty of the method for determination of polysaccharide in Morindae Citritolia Fructus was 0.029 4~0.093 8, and the extended uncertainty was 0.059 0~0.187 6. The three main factors affecting the uncertainty were weighing, concentration preparation and absorbance. Using phenol-sulfuric acid method, this study established determination method for polysaccharide content of Morindae Citritolia Fructus, and showed wide adaptability and high sensitivity. The uncertainty may be fitted into the standard formulation, which would be helpful to establish the quality standard for the content analysis of Morindae Citritolia Fructus.

  • 0 引 言

    0

    海巴戟(Morinda citrifolia L.)为茜草科(Rubiaceae)巴戟天属(Morinda L.)的热带常绿多年生阔叶灌木,发源于太平洋南部岛屿,当地居民称之为“Noni”,我国海南、广东、广西等地有栽培。其根、茎、树皮、叶、花和果实均有应用价值[1,2],其中海巴戟果实已有2 000余年的食用历史,在我国也被海南黎族人民作为药材使用。有研究表明,海巴戟果富含营养成分,果实中的多糖有明显的增强免疫和抗肿瘤作用[3,4,5]。目前,多糖含量的测定方法有比色法、气相色谱法、滴定法、高效液相色谱法、薄层扫描法等,但应用最广泛的为苯酚-硫酸法和蒽酮-硫酸法的比色法[6]。刘海青等[7]和聂风琴[8]采用苯酚-硫酸法研究了海巴戟果水提物中多糖含量的测定及组成分析。然而测定过程步骤多,取样称量、玻璃器皿量取及对照品纯度等都会影响多糖含量的测定,但关于海巴戟药材(Morindae Cirifoliae Fructus)及其多糖含量测定过程中步骤与影响检测结果的研究鲜见报道。

    测量不确定度是与测量结果相关联的参数,用于表征被测量值的分散程度,是定量说明测量结果的重要参数[9,10]。通常不确定度采用统计学分析方法定量给出测量分散性及可信区间,其大小可以决定测量结果的可靠性,不确定度值越小说明测量水平就越高,实用价值就越大[11,12]。本文以海巴戟药材多糖含量测定为例,根据《测量不确定度评定与表示》(JJF1059.1-1999)[13,14]有关规定对分光光度法的测量不确定度进行了分析和研究,建立不确定评估方法,以提高药材含量测定结果的准确性和可靠性。

  • 1 材料与方法

    1
  • 1.1 材料、试剂与仪器

    1.1

    ① 海巴戟药材采自海南岛不同地区,由中国医学科学院药用植物研究所海南分所郑希龙博士鉴定为茜草科巴戟天属海巴戟(Morinda citrifolia L.)植物的果实,切片晒干。原植物腊叶标本保存于海南省中药标本馆,详细来源见表1

    表1 海巴戟药材编号及其来源

    Table 1 Serial number and origin of Morindae Cirifoliae Fructus

    样品编号来源地经纬度
    HBJ20170302QHTM琼海潭门19°14’34.64” N,110°37’26.24” E
    HBJ20170308HKDZG海口东寨港19°58’9.69” N,110°36’12.62” E
    HBJ20170227WCHW文昌会文19°26’12.34” N,110°42’56.98” E
    HBJ20170311SYHTW三亚海棠湾18°18’53.02” N,109°42’5.33” E
    HBJ20170225SYYLG三亚榆林港18°13’13.44” N,109°33’21.66” E
    HBJ20170305LSLA陵水黎安18°26’45.05” N,110°3’29.73” E
    HBJ20170221WNSZ万宁神州半岛18°41’1.61” N,110°21’33.83” E
    HBJ20170221WNXL万宁兴隆18°44’51.59” N,110°14’30.53” E
    HBJ20170221WNLG万宁龙滚19°3’6.94” N,110°31’45.85” E
    HBJ20170221SYYC三亚崖城18°21’54.27” N,109°9’39.11” E
    HBJ20170313WNBP万宁北坡18°47’34.64” N,110°26’35.65” E
    HBJ20170326WCPQ文昌铺前20°1’33.70” N,110°34’48.20” E
    HBJ20170315WCLL文昌龙楼19°39’13.48” N,110°58’5.49” E
    HBJ20170601WNNL1万宁牛漏18°47’1.62” N,110°15’3.87” E
    HBJ20170601WNNL2万宁牛漏18°47’5.51” N,110°14’55.47” E
    HBJ20170601SY三亚崖城18°22’29.31” N,109°10’16.28” E
    表1
                    海巴戟药材编号及其来源

    D-葡萄糖(纯度≥99.8%,北京索莱宝科技有限公司),乙醇、蒸馏水、苯酚、硫酸及其他试剂均为分析纯。

    ③ UV_2450紫外-可见光光度计(日本岛津)、数显6孔恒温水浴锅(峥嵘实验仪器厂)、CP114型1/1万电子天平(奥豪斯仪器有限公司)、PL203型1/1000电子天平(梅特勒-托利多上海仪器有限公司),所用玻璃器皿均为Bomex牌A级。

  • 1.2 实验方法

    1.2
  • 1.2.1 标准曲线

    1.2.1

    精密称量无水葡萄糖对照品10.00 mg,置于100 mL容量瓶中,加适量水溶解,稀释至刻度,摇匀。分别精密量取对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL至具塞试管中,加水补至2.0 mL,各加入5%苯酚溶液1.0 mL,摇匀,迅速加入硫酸5 mL,摇匀,放置10 min,置40 ℃水浴中保温15 min,取出,迅速冷却至室温,以相应试剂为空白,用紫外-可见光分光光度法在490 nm波长处测定吸光度,以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线。

  • 1.2.2 海巴戟药材多糖含量测定方法

    1.2.2

    取海巴戟药材粗粉0.50 g,精密测定,加乙醚100 mL,加热回流1 h,静置,放冷,弃去乙醚溶液,残渣置水浴锅上挥尽乙醚。加入80%乙醇100 mL加热回流1 h,趁热过滤,滤渣与滤器用热80%乙醇30 mL分次洗涤,滤渣与滤纸置烧瓶中,加水100 mL,加热回流2 h,趁热过滤,用少量热水洗涤滤器,合并滤液与洗液,放冷,定容至100 mL,精密量取1 mL置10 mL容量瓶中,定容,精密量取1 mL,置具塞试管中,加水1.0 mL,照标准曲线的制备项下的方法,自“各加入5%苯酚溶液1 mL”起依次测定吸光度,根据标准曲线计算供试品溶液中葡萄糖的质量(mg)。

  • 1.2.3 重现性考察

    1.2.3

    精密称取3批海巴戟果水提物,同批次取3份各0.50 g,按照1.2.2方法同时制备9份样品溶液,精密吸取样品溶液1.0 mL,补水至2.0 mL,按照1.2.1的方法测定吸光度,计算多糖含量。

  • 1.2.4 稳定性考察

    1.2.4

    将1.2.2方法制备的供试品溶液精密吸取1.0 mL,定量至2 mL,4 h内每隔30 min测定一次吸光度,考察其稳定性。

  • 1.2.5 回收率考察

    1.2.5

    精密称取3批海巴戟供试样品,每批取3份各10 mg,加水定容至100 mL,摇匀,得100 mg/L的多糖溶液,精密吸取9份该溶液0.5 mL,并分别加入1.2.1中配制的葡萄糖贮备液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL,定量至2 mL,按照1.2.1方法测定吸光度,计算加样回收率。

  • 1.2.6 不确定度分析

    1.2.6

    海巴戟药材多糖含量不确定度评估可通过建立数学模型(测量过程分析),分析不确定来源,量化不确定度分量,计算合成不确定度及扩展不确定度。

  • 2 结果与分析

    2
  • 2.1 标准曲线及供试品多糖含量

    2.1

    分别精密量取对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL至具塞试管中,分别定量至2.0 mL。以D-葡萄糖为对照品,浓度在0.002 5~0.012 5 g/L范围内与吸光度线性关系良好A=58.24C+0.085(R2=0.999 4)。供试品海巴戟药材多糖含量按照1.2.2方法测定,16批海巴戟药材的多糖含量在5.53%~12.63%之间,见表2

    表2 海巴戟药材多糖含量

    Table 2 Polysaccharide content of Morindae Cirifoliae Fructus

    样品编号含量/%样品编号含量/%
    HBJ20170302QHTM8.75HBJ20170221WNLG6.17
    HBJ20170308HKDZG9.20HBJ20170221SYYC7.15
    HBJ20170227WCHW8.75HBJ20170313WNBP6.35
    HBJ20170311SYHTW8.23HBJ20170326WCPQ6.66
    HBJ20170225SYYLG7.15HBJ20170315WCLL8.47
    HBJ20170305LSLA9.07HBJ20170601WNNL112.52
    HBJ20170221WNSZ6.08HBJ20170601WNNL212.63
    HBJ20170221WNXL5.96HBJ20170601SY5.53
    表2
                    海巴戟药材多糖含量
  • 2.2 重现性考察

    2.2

    精密称取3批海巴戟药材水提物测定多糖含量,结果见表3,求得多糖含量的平均值(以葡萄糖计)为(8.65±0.16)%,RSD=0.79%(n=3)。

    表3 海巴戟药材多糖含量测定重现性考察

    Table 3 A reproducibility study of polysaccharide content in Morindae Cirifoliae Fructus

    样品号多糖含量/%多糖平均含量/%RSD/%
    18.748.65±0.161.84
    28.47
    38.47
  • 2.3 稳定性考察

    2.3

    精密吸取按1.2.2方法制备的供试品溶液1.0 mL,补水至2 mL,供试品溶液在4 h内显色稳定,RSD=1.91%,可进行测定。

  • 2.4 回收率考察

    2.4

    精密吸取已知含量的供试品溶液9份,分别加

    入一定量的葡萄糖溶液,按1.2.1方法分别测定吸光度,结果见表4,求得平均回收率为(98.05±2.28)%,RSD=2.32%。

    表4 多糖回收率测定

    Table 4 Recovery determination of polysacchharide

    样品编号样品中葡萄糖含量/g·L-1加入葡萄糖含量/g·L-1测得葡萄糖含量/g·L-1回收率/%平均回收率/%RSD/%
    1-1-10.0140.0050.019 2101.4398.05±2.282.32
    1-1-20.0140.0050.018 898.57
    1-1-30.0140.0100.023 596.42
    1-2-10.0140.0100.023 898.57
    1-2-20.0140.0150.028 395.00
    1-2-30.0140.0150.028 495.71
    1-3-10.0140.0200.033 596.43
    1-3-20.0140.0200.034 1100.71
    1-3-30.0140.0250.038 999.59
    表4
                    多糖回收率测定
  • 3 不确定度分析

    3

    海巴戟药材中多糖含量的紫外-可见光光度法定量方法的测定不确定度评定可通过建立数学模型,分析不确定度来源,量化不确定度分量,计算合成不确定度及扩展不确定度[7]

  • 3.1 建立数学模型

    3.1

    根据海巴戟药材多糖含量测定的公式,考虑海巴戟药材样品的不均匀性以及样品检测过程,建立如下公式模型:

    X = ( A s - 0.085 ) × V s × f 58.24 m s ×FHom×100% (1)

    此公式由标准曲线方程(A=58.24C+0.085)和海巴戟药材多糖含量公式( X = ( A s - 0.085 ) × V s × f m s × 100 % )演变而来,并引入样品均匀性因子(FHom

    公式中X为供试品中海巴戟多糖的质量分数,As为供试品溶液中多糖的吸光度,Vs为样品溶液的最终稀释体积(mL),f为供试品溶液稀释倍数,ms为海巴戟药材的取样量(g),FHom为样品均匀性因子。

  • 3.2 分析不确定度来源

    3.2

    根据建立的公式模型,考虑紫外-可见光光度计和标准品纯度以及称量对照品的影响,分析不确定度的来源有AsVsfmsm0FHomPW共8个分量。每个不确定度因素均考虑多个因素。紫外-可见光光度法测定海巴戟药材当中的多糖含量的测定不确定度因果关系,见图1

    图 1
                            海巴戟药材多糖含量测定因果关系图

    图 1 海巴戟药材多糖含量测定因果关系图

    Fig. 1 Causality diagram of Morindae Cirifoliae Fructus polysaccharide content determination

  • 3.3 由对照品溶液浓度(C0引起的相对合成标准不确定度urel(C0)

    3.3

    对照品溶液浓度计算公式:

    C 0 ( g / L ) =   A 0 - 0.085 58.24
    (2)

    对照品溶液浓度的影响因素主要有对照品吸光度(A0)、对照品的质量(m0)、对照品纯度(P)以及对照品溶液的量取体积四个方面,58.24为标准曲线方程中的的斜率(K)。具体计算方式如下:

    ① 由对照品纯度引起的相对标准不确定度urel(P):D-葡萄糖对照品(纯度为99.8%),未提供不确定度,参考基准物质的不确定度,属于B类不确定,假定分布区间为(-0.05%,+0.05%),符合矩形分布,取包含因子 k = 3   ,则相对标准不确定度为:

    u r e l P = Δ 3 =   0.000   5 3 = 2.89 × 10 - 5

    ② 由对照品称量引起的相对标准不确定度urel(m0):电子天平校正书上查到d=0.1 mg,示值误差为Δ=±0.5 mg,重复性为1.0 mg。按矩形分布,单次称量天平引起的相对标准不确定度 u m 01 = 0.5 3   = 0.288   7   m g ,重复性引起的相对标准不确定度 u m 02 = 1 3 = 0.577   4   m g ,则由对照品称量引起的相对标准不确定度为:

    u r e l m 0 = u m 01 2 + u m 02 2 m 0 = 0.645   5 10 = 0.065

    ③ 配制对照品溶液引起的相对标准不确定度urel(V0):从A级证书上查到100 mL单线量瓶校正书上查到示值误差Δ= ±0.06,按矩形分布,则 u v 1 = 0.06 3 = 0.03   m L   ;通过多次试验,单线量瓶刻度变动性为0.01 mL,则变动性不确定度为uv2=0.01 mL;在实验室测的温度Τ1=27 ℃,量瓶校准温度为Τ0=25 ℃,查到蒸馏水和玻璃仪器的膨胀系数分别为2.89×10-3、1.5×10-5ΔV=VΤ1-VΤ0=(α-α玻璃)×VΤ0Τ1-Τ0)=0.575, u v 3 = Δ 2   =0.2875,则配制对照品溶液的相对标准不确定度为 u r e l V 0 = u v 1 2 + u v 2 2 + u v 3 2 V 0 = 0.002   9 。因此,对照品溶液C0引起的合成相对标准不确定度urel(C0)=0.065。

  • 3.4 供试品溶液制备过程中相对标准不确定度

    3.4

    ① 供试品称量的相对标准不确定度urel(ms):从电子天平校准书上查到d=1 mg,示值误差Δ=±5 mg,重复性为10 mg。同3.3 ②项下的方法,按矩形分布,单次称量天平差引起的标准不确定度 u m s 1 = 5 3 = 2.887   m g ,重复性引起的标准不确定度 u m s 2 = 1 3 = 5.774   m g ,则由供试品称量引起的相对标准不确定度为:

    u r e l m s = u m s 1 2 + u m s 2 2 m s = 6.455 15 = 0.032

    ② 配制供试品溶液引起的相对标准不确定度urel(Vs): 加入蒸馏水的相对标准不确定度urel(V1):实验室用100 mL量瓶定容,校准书上示值误差为Δ=±0.06 mL,符合矩形分布,其校准不确定度为 u r e l V 11 =   0.06 3 = 0.03   m L ,实验过程中温度引起的相对标准不确定度的计算方法同3.3下③项,则urel(V12)= 0.287 5 mL,则加入蒸馏水引起的相对标准不确定度为:

    u r e l v s = u r e l V 11 2 + u r e l V 12 2 V s = 4.15 × 10 - 4
  • 3.5 供试品溶液的均匀性

    3.5

    海巴戟药材多糖的化学性质较为稳定,Ellison[15]测量不确定度分析样品均匀性引起的相对标准不确定度取估计值0.05,即urel(FHom)=0.05。

  • 3.6 由吸光度引入的相对标准不确定度urel(As)

    3.6

    海巴戟药材溶液进样3次,测量结果及相对不确定度见表5,采用极差法计算吸光度引入的不确定度,当n=3时,极差系数C=1.69,吸光度引入的不确定度按 u r e l ( A s ) = R C × A   计算。由16批样品吸光度引入的相对标准不确定度urel(As)范围为1.24×10-2~6.00×10-2

    表5 海巴戟药材的相对不确定度

    Table 5 Morindae Cirifoliae Fructus relative uncertainty

    样品号吸光度(AsRSD/%极差urel
    HBJ20170302QHTM0.4031.730.0121.76×10-2
    HBJ20170308HKDZG0.4203.280.0212.91×10-2
    HBJ20170227WCHW0.4032.260.0131.76×10-2
    HBJ20170311SYHTW0.3841.350.0082.61×10-2
    HBJ20170225SYYLG0.3452.790.0156.00×10-2
    HBJ20170305LSLA0.4151.350.0142.00×10-2
    HBJ20170221WNSZ0.3061.970.0081.55×10-2
    HBJ20170221WNXL0.3020.580.0035.88×10-2
    HBJ20170221WNLG0.3102.620.0112.10×10-2
    HBJ20170221SYYC0.3134.320.0193.59×10-2
    HBJ20170313WNBP0.3163.170.0152.81×10-2
    HBJ20170316WCPQ0.3273.520.0162.89×10-2
    HBJ20170315WCLL0.3372.790.0183.16×10-2
    HBJ20170601WNNL10.4323.930.0314.25×10-2
    HBJ20170601WNNL20.3142.570.0122.26×10-2
    HBJ20170601SY0.2861.830.0061.24×10-2
    表5
                    海巴戟药材的相对不确定度
  • 3.7 紫外-可见光光度计引入的相对标准不确定度urel(W)

    3.7

    紫外-可见光光度计引入的不确定度主要包括透射比示值误差和透射比重复性引起的相对不确定度。仪器检定证书透射比误差为0.6%,按矩形分布,包含因子 K = 3 ,因为A0=0.372,As=0.398,故对照品测量和样品测量的透射比示值误差引起的相对标准不确定度分别为:

    u r e l A 0 = 0.6 % K × A 0 = 0.6 % 3 × 0.372 = 0.009   3 u r e l A S = 0.6 % K × A s = 0.6 % 3 × 0.398 = 0.008   7

    则透射比示值误差引起的相对标准不确定度 u r e l W 1 = u r e l A 0 2 + u r e l A s 2 = 0.009   3 2 + 0.008   7 2 = 0.013 ,重复性引入的标准不确定度urel(W2)=0。因此,由紫外-可见光光度计引入的相对标准不确定度urel(W)=0.013。

  • 3.8 合成标准不确定度及扩展不确定度

    3.8

    海巴戟药材中多糖的紫外-可见光光度法的相对合成不确定度按公式:[urel(C)]2=urel(P)2+urel(m0)2+urel(V0)2+urel(ms)2+urel(Vs)2+urel(FHom)2+urel(As)2+urel(W)2计算,按公式u(C)= [urel(C)] ×C计算合成不确定度。设置95%置信概率,取扩展因子K=2,计算扩展相对标准不确定度按u=K × u(C)计算,结果见表6

    表 6 海巴戟药材多糖含量测定合成不确定度及扩展不确定度

    Table 6 Combined uncertainty and exbanded uncertainty of determination of the polysaccharide content of Morindae Cirifoliae Fructus

    样品号urel(C)合成标准不确定度uC扩展不确定度u
    HBJ20170302QHTM0.017 40.029 40.059 0
    HBJ20170308HKDZG0.055 20.093 20.186 5
    HBJ20170227WCHW0.055 20.093 20.186 5
    HBJ20170311SYHTW0.086 20.14570.291 3
    HBJ20170225SYYLG0.055 20.093 30.186 6
    HBJ20170305LSLA0.055 20.093 20.186 5
    HBJ20170221WNSZ0.017 40.029 50.058 5
    HBJ20170221WNXL0.055 20.093 20.186 5
    HBJ20170221WNLG0.055 10.093 20.186 5
    HBJ20170221SYYC0.055 20.093 20.186 5
    HBJ20170313WNBP0.055 10.093 20.186 5
    HBJ20170316WCPQ0.055 20.093 20.186 5
    HBJ20170315WCLL0.055 60.093 80.187 6
    HBJ20170601WNNL10.055 20.093 20.186 5
    HBJ20170601WNNL20.017 40.093 20.186 5
    HBJ20170601SY0.077 40.029 50.059 0
    表 6
                    海巴戟药材多糖含量测定合成不确定度及扩展不确定度
  • 4 讨 论

    4
  • 4.1 海巴戟药材多糖含量测定方法

    4.1

    苯酚-硫酸比色法测定是利用海巴戟药材多糖在浓硫酸作用下水解成单糖,迅速脱水生成糠醛衍生物,再与苯酚缩和成有色化合物用分光光度法测定多糖含量,方法操作简单、显色稳定、灵敏性高和重现性好。本论文采用苯酚-硫酸法测定海巴戟药材多糖含量,测定结果较稳定(RSD<5%),其浓度在0.002 5~0.012 5 g/L范围内与吸光度线性关系良好,A=58.24C+0.085(R2=0.999 4),供试品溶液在4 h内显色稳定(RSD=1.91%),加标回收率为98.05%±2.28%(RSD=2.32%),本研究中采自海南不同地区的16批海巴戟药材的含糖量在5.53%~12.63%之间。刘海青等[7]也用该方法对海巴戟果水提物的多糖含量进行测量,测定浓度和吸收度线性关系良好(R2=0.998 4),多糖的平均回收率为100.15%(RSD=0.8%)。聂风琴[8]研究了海巴戟多糖含量,加标回收率为99.56%,平均含量为11.62%,干果多糖含量明显高于叶片。采用硫酸-苯酚法可用于测定海巴戟药材多糖含量的测定,并可纳入标准制定。根据参考文献[7]和中国药典[16]有关测定多糖含量的方法,综合考虑,本实验采取苯酚-硫酸法测定海巴戟药材中的多糖含量。

  • 4.2 相对标准不确定度分析

    4.2

    16批海巴戟药材的合成不确定度为0.029 4~0.145 7,扩展不确定度为0.058 5~0.291 3,此测量范围可以满足海巴戟药材的检测限值。此外,经过统计分析,影响海巴戟药材多糖含量测定的8个分量与测定海巴戟多糖含量之间存在相关性。测量过程中每个影响因素之间都相互关联,应采取相应的措施,减少测量结果的不确定度,应做好以下几个方面的工作:①称量过程中应保持称量纸干燥以及天平平衡;②正确使用玻璃器皿,保证读数准确;③定期做好仪器的各项参数检查,使其始终处于良好稳定的工作状态。

    本研究建立的苯酚-硫酸法测定海巴戟药材中的多糖含量具有操作简便,适应性广,灵敏度高,快速等优点,将测量结果不确定度纳入标准制定,对海巴戟药材痕量分析方法的建立以及质量标准的制定具有积极的意义,从而有利于对海巴戟药材资源的开发利用。

    • 1

      Gu X J. Expensive weird fruit: Noni [J]. Word Market Journal, 2001, (1): 12-13.

      顾湘隽. 身价不菲的怪果:诺丽[J]. 国际市场, 2001, (1): 12-13.

    • 2

      Zin Z M, Hamid A A, Osman A, et al. Isolation and identification of antioxidative compound from fruit of Mengkudu (Morinda citrifolia L.) [J]. International Journal of Food Properties, 2007, 10(2): 363-373.

    • 3

      Hirazumi A, Furusawa E. An immunomodulatory polysaccharide-rich substance from the fruit juice of Morinda citrifolia (noni) with antitumour activity [J]. Phytotherapy Research Ptr, 2015, 13(5): 380-387.

    • 4

      Zhang X M. The immunoregulatory polysaccharides in the juice of Morinda citrifolia are antitumor [J]. Drugs and Clinic, 2000, 15(5): 207-208.

      张学梅. 海巴戟果汁中具免疫调节作用的多糖具抗肿瘤作用[J]. 现代药物与临床, 2000, 15(5): 207-208.

    • 5

      Li J, Stickel S L, Bouton-Verville H, et al. Fermented Noni exudate (fNE): a mediator between immune system and anti-tumor activity [J]. Oncology Reports, 2008, 20(6): 1505.

    • 6

      Huang R S. An overview of the methods for the determination of polysaccharides in Chinese herbal medicine[J]. China Pharm, 2005, 8(1): 68-70.

      黄瑞松. 中草药多糖含量测定方法概述[J]. 中国药师, 2005, 8(1): 68-70.

    • 7

      Liu H Q, Zhang N, Xu J F, et al. Determination and composition analysis of polysaccharide content in water extract of Morinda citrifolia fruit [J]. Grain and Oil Food Technology, 2008, 16(5): 64-66.

      刘海青, 张娜, 徐剑锋, 等. 海巴戟果水提物中多糖含量的测定及组成分析[J]. 粮油食品科技, 2008, 16(5): 64-66.

    • 8

      Nie F Q. Morinda citrifolia (NONI) on nutritional and functional components of germplasm resources[D]. Haikou: Hainan University, 2015.

      聂风琴. 海巴戟(NONI)种质资源营养成分和功能成分研究[D]. 海口:海南大学, 2015.

    • 9

      Ma D L, West B J, Su C X, et al. Evaluation of the ergogenic potential of noni juice [J]. Phytother Res, 2007, 21(11): 1100-1101.

    • 10

      National Bureau of Quality and Technical Supervision.Measurement uncertainty evaluation and presentation guide[M]. Beijing: China Metrology Publishing House, 2001.

      国家质量技术监督局计量司. 测量不确定度评定与表示指南[M]. 北京:中国计量出版社, 2001.

    • 11

      Xue Z, Xu B, Liu Q, et al. Application of uncertainty evaluation in the quantitative analysis of traditional Chinese medicine [J]. Spectroscopy and Spectral Analysis, 2014, 34(10): 2657-2661.

      薛忠, 徐冰, 刘倩, 等. 不确定度评估在中药近红外定量分析中的应用[J]. 光谱学与光谱分析, 2014, 34(10): 2657-2661.

    • 12

      Feng J, Chen D L, Lv J C, et al. Measurement uncertainty of agarwood in aloes was evaluated [J]. Journal of Experimental Chinese Medicine, 2017, 23(13): 86-91.

      冯剑, 陈德力, 吕俊辰, 等. 沉香中沉香四醇的测量不确定度评估[J]. 中国实验方剂学杂志, 2017, 23(13): 86-91.

    • 13

      National Bureau of Quality and Technical Supervision. Determination of uncertainty evaluation and presentation, JJF1059-1999[S]. Beijing: China Metrology Publishing House, 1999: 2-21.

      国家质量技术监督局.《测定不确定度评定与表示》JJF1059-1999[S]. 北京:中国计量出版社, 1999: 2-21.

    • 14

      General Administration of Quality Supervision, Inspection and Quarantine of the People's Republic of China. JJF1135-2005 Chemical analysis measurement uncertainty evaluation [S]. Beijing: China Metrology Publishing House, 2005:1-9.

      国家质量监督检验检疫总局. JJF1135-2005化学分析测量不确定度评定[S]. 北京:中国计量出版社, 2005: 1-9.

    • 15

      Ellison S R, Rosslein M, Williams A, et al. Eurachem/CITAC Guide CG4. Quantifying measurement uncertainty in analytical[M]. London: UK National Measurement System, 2011.

    • 16

      Chinese Pharmacopoeia Commission.Pharmacopoeia of the People's Republic[M]. Beijing: China Medical Science and Technology Press, 2015: 185.

      国家药典委员会. 中华人民共和国药典[M]. 北京:中国医药科技出版社, 2015: 185.

王小英

工作单位:1中国医学科学院&北京协和医学院药用植物研究所海南分所 海南省南药资源保护与开发重点实验室,海南 海口 570311

冯剑

工作单位:1中国医学科学院&北京协和医学院药用植物研究所海南分所 海南省南药资源保护与开发重点实验室,海南 海口 570311

黄梦利

工作单位:1中国医学科学院&北京协和医学院药用植物研究所海南分所 海南省南药资源保护与开发重点实验室,海南 海口 570311

欧阳冬青

工作单位:1中国医学科学院&北京协和医学院药用植物研究所海南分所 海南省南药资源保护与开发重点实验室,海南 海口 570311

林天东

工作单位:2海南省中医院,海南 海口 570203

刘洋洋

工作单位:1中国医学科学院&北京协和医学院药用植物研究所海南分所 海南省南药资源保护与开发重点实验室,海南 海口 570311

联系方式:E-mail: eadchris@163.com

样品编号来源地经纬度
HBJ20170302QHTM琼海潭门19°14’34.64” N,110°37’26.24” E
HBJ20170308HKDZG海口东寨港19°58’9.69” N,110°36’12.62” E
HBJ20170227WCHW文昌会文19°26’12.34” N,110°42’56.98” E
HBJ20170311SYHTW三亚海棠湾18°18’53.02” N,109°42’5.33” E
HBJ20170225SYYLG三亚榆林港18°13’13.44” N,109°33’21.66” E
HBJ20170305LSLA陵水黎安18°26’45.05” N,110°3’29.73” E
HBJ20170221WNSZ万宁神州半岛18°41’1.61” N,110°21’33.83” E
HBJ20170221WNXL万宁兴隆18°44’51.59” N,110°14’30.53” E
HBJ20170221WNLG万宁龙滚19°3’6.94” N,110°31’45.85” E
HBJ20170221SYYC三亚崖城18°21’54.27” N,109°9’39.11” E
HBJ20170313WNBP万宁北坡18°47’34.64” N,110°26’35.65” E
HBJ20170326WCPQ文昌铺前20°1’33.70” N,110°34’48.20” E
HBJ20170315WCLL文昌龙楼19°39’13.48” N,110°58’5.49” E
HBJ20170601WNNL1万宁牛漏18°47’1.62” N,110°15’3.87” E
HBJ20170601WNNL2万宁牛漏18°47’5.51” N,110°14’55.47” E
HBJ20170601SY三亚崖城18°22’29.31” N,109°10’16.28” E
样品编号含量/%样品编号含量/%
HBJ20170302QHTM8.75HBJ20170221WNLG6.17
HBJ20170308HKDZG9.20HBJ20170221SYYC7.15
HBJ20170227WCHW8.75HBJ20170313WNBP6.35
HBJ20170311SYHTW8.23HBJ20170326WCPQ6.66
HBJ20170225SYYLG7.15HBJ20170315WCLL8.47
HBJ20170305LSLA9.07HBJ20170601WNNL112.52
HBJ20170221WNSZ6.08HBJ20170601WNNL212.63
HBJ20170221WNXL5.96HBJ20170601SY5.53
样品号多糖含量/%多糖平均含量/%RSD/%
18.748.65±0.161.84
28.47
38.47
样品编号样品中葡萄糖含量/g·L-1加入葡萄糖含量/g·L-1测得葡萄糖含量/g·L-1回收率/%平均回收率/%RSD/%
1-1-10.0140.0050.019 2101.4398.05±2.282.32
1-1-20.0140.0050.018 898.57
1-1-30.0140.0100.023 596.42
1-2-10.0140.0100.023 898.57
1-2-20.0140.0150.028 395.00
1-2-30.0140.0150.028 495.71
1-3-10.0140.0200.033 596.43
1-3-20.0140.0200.034 1100.71
1-3-30.0140.0250.038 999.59
/html/swzy/201804008/alternativeImage/c32d5bd2-d4b7-4a69-bc0e-f9d310c2f625-F001.jpg
样品号吸光度(AsRSD/%极差urel
HBJ20170302QHTM0.4031.730.0121.76×10-2
HBJ20170308HKDZG0.4203.280.0212.91×10-2
HBJ20170227WCHW0.4032.260.0131.76×10-2
HBJ20170311SYHTW0.3841.350.0082.61×10-2
HBJ20170225SYYLG0.3452.790.0156.00×10-2
HBJ20170305LSLA0.4151.350.0142.00×10-2
HBJ20170221WNSZ0.3061.970.0081.55×10-2
HBJ20170221WNXL0.3020.580.0035.88×10-2
HBJ20170221WNLG0.3102.620.0112.10×10-2
HBJ20170221SYYC0.3134.320.0193.59×10-2
HBJ20170313WNBP0.3163.170.0152.81×10-2
HBJ20170316WCPQ0.3273.520.0162.89×10-2
HBJ20170315WCLL0.3372.790.0183.16×10-2
HBJ20170601WNNL10.4323.930.0314.25×10-2
HBJ20170601WNNL20.3142.570.0122.26×10-2
HBJ20170601SY0.2861.830.0061.24×10-2
样品号urel(C)合成标准不确定度uC扩展不确定度u
HBJ20170302QHTM0.017 40.029 40.059 0
HBJ20170308HKDZG0.055 20.093 20.186 5
HBJ20170227WCHW0.055 20.093 20.186 5
HBJ20170311SYHTW0.086 20.14570.291 3
HBJ20170225SYYLG0.055 20.093 30.186 6
HBJ20170305LSLA0.055 20.093 20.186 5
HBJ20170221WNSZ0.017 40.029 50.058 5
HBJ20170221WNXL0.055 20.093 20.186 5
HBJ20170221WNLG0.055 10.093 20.186 5
HBJ20170221SYYC0.055 20.093 20.186 5
HBJ20170313WNBP0.055 10.093 20.186 5
HBJ20170316WCPQ0.055 20.093 20.186 5
HBJ20170315WCLL0.055 60.093 80.187 6
HBJ20170601WNNL10.055 20.093 20.186 5
HBJ20170601WNNL20.017 40.093 20.186 5
HBJ20170601SY0.077 40.029 50.059 0

表1 海巴戟药材编号及其来源

Table 1 Serial number and origin of Morindae Cirifoliae Fructus

表2 海巴戟药材多糖含量

Table 2 Polysaccharide content of Morindae Cirifoliae Fructus

表3 海巴戟药材多糖含量测定重现性考察

Table 3 A reproducibility study of polysaccharide content in Morindae Cirifoliae Fructus

表4 多糖回收率测定

Table 4 Recovery determination of polysacchharide

图 1 海巴戟药材多糖含量测定因果关系图

Fig. 1 Causality diagram of Morindae Cirifoliae Fructus polysaccharide content determination

表5 海巴戟药材的相对不确定度

Table 5 Morindae Cirifoliae Fructus relative uncertainty

表 6 海巴戟药材多糖含量测定合成不确定度及扩展不确定度

Table 6 Combined uncertainty and exbanded uncertainty of determination of the polysaccharide content of Morindae Cirifoliae Fructus

image /

无注解

无注解

无注解

无注解

无注解

无注解

无注解

    • 1

      Gu X J. Expensive weird fruit: Noni [J]. Word Market Journal, 2001, (1): 12-13.

      顾湘隽. 身价不菲的怪果:诺丽[J]. 国际市场, 2001, (1): 12-13.

    • 2

      Zin Z M, Hamid A A, Osman A, et al. Isolation and identification of antioxidative compound from fruit of Mengkudu (Morinda citrifolia L.) [J]. International Journal of Food Properties, 2007, 10(2): 363-373.

    • 3

      Hirazumi A, Furusawa E. An immunomodulatory polysaccharide-rich substance from the fruit juice of Morinda citrifolia (noni) with antitumour activity [J]. Phytotherapy Research Ptr, 2015, 13(5): 380-387.

    • 4

      Zhang X M. The immunoregulatory polysaccharides in the juice of Morinda citrifolia are antitumor [J]. Drugs and Clinic, 2000, 15(5): 207-208.

      张学梅. 海巴戟果汁中具免疫调节作用的多糖具抗肿瘤作用[J]. 现代药物与临床, 2000, 15(5): 207-208.

    • 5

      Li J, Stickel S L, Bouton-Verville H, et al. Fermented Noni exudate (fNE): a mediator between immune system and anti-tumor activity [J]. Oncology Reports, 2008, 20(6): 1505.

    • 6

      Huang R S. An overview of the methods for the determination of polysaccharides in Chinese herbal medicine[J]. China Pharm, 2005, 8(1): 68-70.

      黄瑞松. 中草药多糖含量测定方法概述[J]. 中国药师, 2005, 8(1): 68-70.

    • 7

      Liu H Q, Zhang N, Xu J F, et al. Determination and composition analysis of polysaccharide content in water extract of Morinda citrifolia fruit [J]. Grain and Oil Food Technology, 2008, 16(5): 64-66.

      刘海青, 张娜, 徐剑锋, 等. 海巴戟果水提物中多糖含量的测定及组成分析[J]. 粮油食品科技, 2008, 16(5): 64-66.

    • 8

      Nie F Q. Morinda citrifolia (NONI) on nutritional and functional components of germplasm resources[D]. Haikou: Hainan University, 2015.

      聂风琴. 海巴戟(NONI)种质资源营养成分和功能成分研究[D]. 海口:海南大学, 2015.

    • 9

      Ma D L, West B J, Su C X, et al. Evaluation of the ergogenic potential of noni juice [J]. Phytother Res, 2007, 21(11): 1100-1101.

    • 10

      National Bureau of Quality and Technical Supervision.Measurement uncertainty evaluation and presentation guide[M]. Beijing: China Metrology Publishing House, 2001.

      国家质量技术监督局计量司. 测量不确定度评定与表示指南[M]. 北京:中国计量出版社, 2001.

    • 11

      Xue Z, Xu B, Liu Q, et al. Application of uncertainty evaluation in the quantitative analysis of traditional Chinese medicine [J]. Spectroscopy and Spectral Analysis, 2014, 34(10): 2657-2661.

      薛忠, 徐冰, 刘倩, 等. 不确定度评估在中药近红外定量分析中的应用[J]. 光谱学与光谱分析, 2014, 34(10): 2657-2661.

    • 12

      Feng J, Chen D L, Lv J C, et al. Measurement uncertainty of agarwood in aloes was evaluated [J]. Journal of Experimental Chinese Medicine, 2017, 23(13): 86-91.

      冯剑, 陈德力, 吕俊辰, 等. 沉香中沉香四醇的测量不确定度评估[J]. 中国实验方剂学杂志, 2017, 23(13): 86-91.

    • 13

      National Bureau of Quality and Technical Supervision. Determination of uncertainty evaluation and presentation, JJF1059-1999[S]. Beijing: China Metrology Publishing House, 1999: 2-21.

      国家质量技术监督局.《测定不确定度评定与表示》JJF1059-1999[S]. 北京:中国计量出版社, 1999: 2-21.

    • 14

      General Administration of Quality Supervision, Inspection and Quarantine of the People's Republic of China. JJF1135-2005 Chemical analysis measurement uncertainty evaluation [S]. Beijing: China Metrology Publishing House, 2005:1-9.

      国家质量监督检验检疫总局. JJF1135-2005化学分析测量不确定度评定[S]. 北京:中国计量出版社, 2005: 1-9.

    • 15

      Ellison S R, Rosslein M, Williams A, et al. Eurachem/CITAC Guide CG4. Quantifying measurement uncertainty in analytical[M]. London: UK National Measurement System, 2011.

    • 16

      Chinese Pharmacopoeia Commission.Pharmacopoeia of the People's Republic[M]. Beijing: China Medical Science and Technology Press, 2015: 185.

      国家药典委员会. 中华人民共和国药典[M]. 北京:中国医药科技出版社, 2015: 185.